2013年9月7日 星期六

靈芝孢子粉對亞硝酸鈉致果蠅畸變效應的抑製作用研究

摘要:目的研究靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的黑腹果蠅畸變效應的抑製作用。方法將野生型雄性黑腹果蠅飢餓處理24h, 接著轉移到0、0.001、0.01、0.05和0.1g/L的亞硝酸鈉培養基里培養24h,再加入雌果蠅培養7d。以0、0.2%、1%、2%的去壁和未去壁靈芝孢子粉培養經0、0.01、0.1g/L亞硝酸鈉染毒24h後的果蠅7d,以基本培養基培養的果蠅為陰性對照。統計子代果蠅數和畸變數,併計算畸變率。結果畸變的果蠅主要以殘翅居多,還有一些是白體,極個別的眼睛發生畸變。隨著亞硝酸鈉染毒濃度的增加,子代果蠅數呈下降趨勢,畸變率呈上升趨勢。隨著未去壁靈芝孢子粉染毒濃度的增加,子代果蠅數呈下降趨勢。與陰性對照組相比,0.1、0.01g/L亞硝酸鈉+0.2%的未去壁靈芝孢子粉組子代果蠅畸變率均較高,差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01 )。與陰性對照組相比,0.01g/L亞硝酸鈉+1%,2%的去壁靈芝孢子粉組和0.1g/L亞硝酸鈉+0.2%的去壁靈芝孢子粉組子代果蠅數均較多,差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。隨著去壁靈芝孢子粉染毒濃度的增加,子代果蠅畸變率呈下降趨勢。結論靈芝孢子粉可抑制亞硝酸鈉誘發的果蠅畸變效應。關鍵詞:靈芝孢子;畸變;果蠅;亞硝酸鈉中圖分類號:R994.6 文獻標識碼:A AntagonisticEffectsofGanodermaSporeonMutationInducedbySodiumNitriteinDrosophilamelanogasterWANGXin,LULu,YEJing-bo,etal.SchoolofLifeSciences,SunYat-senUniversity,Guangzhou,Guangdong510275,China Abstract: ObjectiveTostudytheantagonisticeffectsofGanodermasporeonmutationinducedbyNaNO2inDrosophilamelanogaster.MethodsAfter24hoursofstarvation,maleDrosophilamelanogasterweretransferredtotheculturebottleswith mediumwithNaNO2of0, 0.001,0.01,0.05and0.1g/Lfor24hoursandthenculturedwithfemaleDrosophilamelanogasterfor7days.MaleDrosophilamelanogasterweretreatedwithNaNO2atthedosesof0,0.01,0.001g/Lfor24hoursandthentransferredtothemediumwithGanodermasporesatthedoseof0.2%,1%,2%,culturedwithfemaleDrosophilamelanogasterfor7days.Thedistilledwaterwasusedasthenegativecontrol.TheamountofF1generationandthemutationoftheF1generationwerecalculated.ResultsThemutationDrosophilamelanogasterweremainlyvestigial,somehadmalformationwithwhitebodyandstrangeeyes.Comparedwiththenegativecontrolgroup,thecountofoffspringdecreased, therateofmutationprovedpositivelycorrelatedtotheconcentrationofNaNO2.Highdoseofsporoderm-unbrokensporescouldcauseadecreaseofnumberofoffspring.Comparedwiththenegativecontrolgroup,themutationinthegroupof0.1,0.01g/LNaNO2with0.2%sporoderm-unbrokensporeswasmuchhigher(P<0.01orP<0.05).Comparedwiththenegativegroup,numberofoffspringinthegroupof0.01g/LNaNO2with1%,2%sporoderm-brokenandthegroupof0.1g/LNaNO2with0. 2%sporoderm-brokenincreased(P<0.01orP<0.05).Therateofmutationprovednegativelycorrelatedtotheconcentrationofsporoderm-brokenspores.ConclusionGanodermasporehasasignificantantagonisticeffectsonmutationinducedbyNaNO2inDrosophilamelanogaster. Keywords:Ganodermaspore;Mutation;Drosophilamelanogaster;Sodiumnitrite基金項目:中山大學實驗室開放基金資助項目(KF200808)作者單位:中山大學生命科學院(廣東廣州510275)作者簡介:王鑫(1987-),男,本科生,從事環境和人類健康研究。通訊作者:何炎明,E-mail: heym@mail.sysu.edu.cn 靈芝(Ganodermalucidum)是一種珍貴的藥用真菌,屬於擔子菌綱、多孔菌科、靈芝菌亞科、靈芝菌屬[1-3]。靈芝在發育後期彈射釋放出的種子在生物學上稱擔孢子,集中起來後呈粉末狀,通稱靈芝孢子粉,靈芝孢子粉在增強免疫、抑制腫瘤方面的藥效遠超過其母體靈芝[4] 。目前,有關靈芝孢子粉的解毒和增強生殖能力的研究很少報導。本研究以性狀明顯、生活週期短的黑腹果蠅為實驗材料[5,6] ,從靈芝孢子粉對亞硝酸鈉致果蠅遺傳及畸變率的影響出發設計實驗,旨在通過高通量的果蠅遺傳統計學數據來檢驗靈芝孢子粉對亞硝酸鈉致畸變效應的抑製作用,並定性比較破壁靈芝孢子粉與未破壁靈芝孢子粉抗畸變效果的差異。 1材料與方法1.1 主要試劑亞硝酸鈉(分析純,天津市化學試劑一廠)。靈芝孢子粉(濃度為100%,廣東省微生物研究所廣東粵微食用菌技術有限公司)。野生型雄性黑腹果蠅[中山大學生命科學院遺傳學實驗室提供,18號品系,實驗動物生產許可證號為:SCXK(粵)2004-0011,實驗動物使用許可證號為:SYXK(粵) 2007-0081]。 1.2 果蠅基本培養基的配製普通果蠅培養基參照文獻[7]略加改良,向1L水中加入8g瓊脂、100g麥片、90g紅糖、8ml丙酸、5g酵母粉,分裝於培養管裡,每管50g。染毒培養基是在普通培養基上加入一定濃度的亞硝酸鈉,靈芝孢子粉解毒組是在普通培養基上加入一定量的去壁和不去壁靈芝孢子粉。 1.3 方法1.3.1 亞硝酸鈉對子代果蠅的致畸變效應實驗將雄果蠅飢餓處理24h,接著轉移到0、0.001、0.01、0.05和0.1g/L的亞硝酸鈉培養基里培養24h,再加入雌果蠅,每個培養瓶有5對親本,常溫下(25℃)培養7d。 1.3.2 靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅畸變效應的抑製作用實驗把雄果蠅飢餓處理24h,然後轉移到0.1和0.01g/L 的亞硝酸鈉染毒培養基中,染毒24h,再轉移到0.2%,1%,2%的【論著】 598· · 環境與健康雜誌2009年7月第26卷第7期JEnvironHealth,July2009,Vol. 26,No. 7 去壁和未去壁的靈芝孢子粉解毒培養基中,各6管,並以普通培養基為陰性對照,最後放入雌果蠅,每個培養瓶有5對親本,常溫下(25℃ )培養7d。 1.4 檢測指標統計各管子代果蠅的雄、 雌數及畸變數,畸變主要通過觀察翅膀、眼睛和體色等幾個方面進行確定。 1.5 統計學方法採用SPSS10.0軟件進行統計學分析。計量資料數據以x±s進行表示,多組間比較採用單因素方差分析(OneWayANOVA),組間兩兩比較採用SNK檢驗;率間比較採用χ2 檢驗。以P<0.05表示差異有統計學意義。 2結果2.1 亞硝酸鈉對子代果蠅的致畸變效應實驗亞硝酸鈉對子代果蠅的致畸變效應實驗結果見表1。表1可見,與對照組相比,0.001、0.01、0.05和0.1g/L的亞硝酸鈉染毒組子代果蠅數均較少,畸變率均較高,差異有統計學意義(P< 0.05或P<0.01 )。且隨著亞硝酸鈉染毒濃度的增加,子代果蠅數呈下降趨勢,畸變率呈上升趨勢。畸變的果蠅主要以殘翅居多,還有一些是白體,極個別的眼睛發生畸變。 2.2靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅畸變效應的抑製作用實驗畸變的果蠅主要以殘翅居多,還有一些是白體,極個別的個體眼睛有畸變。 2.2.1 未去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅畸變效應的抑製作用實驗未去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅畸變效應的抑製作用實驗結果見表2。表2可見,與陰性對照組相比,0.01g/L亞硝酸鈉+0.2%,1%,2%的未去壁靈芝孢子粉組子代果蠅數均較多,差異有統計學意義( P<0.05或P<0.01);而0.1g/L亞硝酸鈉+0.2%,1%,2%的未去壁靈芝孢子粉組子代果蠅數均較多,但差異無統計學意義( P>0.05)。且隨著未去壁靈芝孢子粉染毒濃度的增加,子代果蠅數呈下降趨勢。與陰性對照組相比,0.1、0.01g/L亞硝酸鈉+0.2%的未去壁靈芝孢子粉組子代果蠅畸變率均較高,差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01 )。 2.2.2去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅畸變效應的抑製作用實驗去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅畸變效應的抑製作用實驗結果見表3。表3可見,與陰性對照組相比,0.01g/L亞硝酸鈉+1%,2%的去壁靈芝孢子粉組和0.1g/L亞硝酸鈉+0.2%的去壁靈芝孢子粉組子代果蠅數均較多,差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01 )。與陰性對照組相比,0.01、0.1g/L亞硝酸鈉+0.2%的去壁靈芝孢子粉組子代果蠅畸變率均較高,差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01) ;且隨著去壁靈芝孢子粉染毒濃度的增加,子代果蠅畸變率呈下降趨勢。 3討論本次研究結果顯示,亞硝酸鈉對果蠅有很強的致畸變效應,且致畸變效應隨著亞硝酸鈉濃度的增加而升高;去壁和未去壁的靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的畸變效應有良好的抑制效應,並且隨著濃度的增大,抑制效果更明顯。亞硝酸鈉有較強毒性,並且是致​​癌物質,在亞硝酸鈉分子中,氮是+3價,既有還原性又有氧化性。靈芝作為中醫良藥,在於其本身含有的複雜藥用成分。有研究表明,其提取物中除含有人體所必需的多醣類、蛋白質、維生素、氨基酸外,還含有甾醇、內脂、香豆精等;另外,靈芝中的礦物質和微量元素極其豐富,尤其是鍺元素含量較多[1]。這些物質對細胞的生長和分化、細胞之間的信息交流、神經系統的激動性和傳導性都有重要作用[8]。這可能是靈芝可以起到解毒作用的主要原因之一。靈芝孢子粉的活性部位主要在壁內,所以破壁的靈芝孢子粉應該有比未破壁的靈芝孢子粉更好的藥效。但要想獲得全破壁的靈芝孢子粉而又不破壞裡面的活性物質在工業上有一定難度,這導致目前市面上破壁靈芝孢子粉的價格要遠遠高於未破壁的靈芝孢子粉價格[4]。本次研究結果顯示,畸變的果蠅主要以殘翅居多,還有一些是白體,極個別的眼睛發生畸變。隨著亞硝酸鈉染毒濃度的增加,子代果蠅數呈下降趨勢,畸變率呈上升趨勢。隨著未去壁靈芝孢子粉染毒濃度的增加,子代果蠅數呈下降趨勢。與陰性對照組相比,0.1、0.01g/L亞硝酸鈉+0.2%的未去壁靈芝孢子粉組子代果蠅畸變率均較高,差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01 )。本次研究結果顯示,與陰性對照組相比,0.01g/L亞硝酸鈉+1%,2%的去壁靈芝孢子粉組和0.1g/L亞硝酸鈉+0.2%的去壁靈芝孢子粉組子代果蠅數均較多,0.01、0.1g/L亞硝酸鈉+0.2%的去 壁靈芝孢子粉組子代果蠅畸變率均較高,差異有統計學意義 表1 亞硝酸鈉對子代果蠅的致畸變效應實驗劑量(g/L)00.0010.010.050.1 數目(x±s,只)345.38±32.32290.98±48.43*173.27±13.67**167.78±23.32 **101.11±21.23** 雄∶雌0.921.051.21*0.891.40** 畸變率(%)0.580.341.15*2.97*5.94** ( n =6) 注:與對照(0g/L)組比較,*P<0.05,**P<0.01。表3 去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果蠅 畸變效應的抑製作用實驗亞硝酸鈉(g/L)0 0.01 0.1 去壁靈芝孢子粉(%)00.212 0.21 2數目(x±s,只)345.38±32.32414.44±24.32 581.98±26.65**549.89± 14.43**453.23±34.53*439.48±32.44 400.22±21.76 雄∶雌0.920.58 0.78 0.920.820.680.86 (n=6) 畸變率(%)0.582.66*1.200.913.31**0.910.50 注:與陰性對照組比較,*P<0.05,**P<0.01。表2 未去壁靈芝孢子粉對亞硝酸鈉誘發的子代果 蠅畸變效應的抑製作用實驗亞硝酸鈉(g/L)00.01 0.1 未去壁靈芝孢子粉(%)00.212 0.212 數目(x±s,只)345.38±32.32 525.21±44.34**492.77±34.23* 464.56±24.32*445.43±64.21439.49±33.78399.88±34.62 雄∶雌0.92 0.961.090.881.140.820.87 (n=6) 畸變率(%) 0.581.90*1.211.302.70**0.910.50 注:與陰性對照組比較,*P<0.05,**P<0.01。 599· · 環境與健康雜誌2009年7月第26卷第7期JEnvironHealth,July2009,Vol. 26,No. 7 (P<0.05或P<0.01);且隨著去壁靈芝孢子粉染毒濃度的增加,子代果蠅畸變率呈下降趨勢。與陰性對照組相比,經過未去壁靈芝孢子粉處理的果蠅子一代數目隨著染毒濃度的增加呈下降趨勢,而經過去壁靈芝孢子粉處理後的果蠅子一代數目隨著染毒濃度的增加呈上升的趨勢。這提示靈芝孢子粉對果蠅的繁殖有一定的影響,未去壁靈芝孢子粉對果蠅的繁殖有一定的抑製作用,而去壁靈芝孢子粉則可以促進果蠅的繁殖。目前,對靈芝孢子粉的研究主要集中在抗癌作用、免疫作用、除自由基作用等方面[9],而關於其對生殖影響的報導較少。靈芝孢子粉對果蠅生殖的影響可能與靈芝孢子粉的抗氧化和清除自由基作用有關[10]。由於未去壁靈芝孢子粉的活性較差,高濃度的未去壁靈芝孢子粉清除超氧陰離子自由基的能力有所下降。本次實驗可以為研究靈芝孢子粉對人類生殖功能的影響提供參考信息,但仍需要進一步研究。參考文獻: [1]郭春沅.靈芝的藥理研究綜述〔J〕.中國食用菌,1998,17(3):34-35. [2]武變英,徐月清.靈芝浸液對小鼠免疫功能的調節作用〔J〕.河北大學學報自然科學版,1999,19(1):84-87.[3]楊星星,方放治.靈芝孢子粉對小鼠實驗性突變和移植性腫瘤的影響〔J〕 .第一軍醫大學學報,2000,20(3):245-247.[4]LiuX,WangJH,YuanJP.Pharamacologicalandanti-tumoractivities ofganodermasporesprocessedbytop-downapproaches〔J〕.JournalofNanoscienceandNanotechnology,2005,5:2001-2013.[5]王秀琴,黃淑峰,李宗芸.硫酸缽對果蠅壽命及繁殖力的影響〔J〕.環境與職業醫學,2007,24(6):614-616.[6]張輝,蔡智鳴,厲曙光,等.鐵路餐車中反复煎炸剩油對果蠅的遺傳毒性〔J〕.福建師範大學學報自然科學版,2000,16(4):118-120.[7]王金發,康戚標,何炎明.遺傳學實驗教程〔M〕.北京:高等教育出版社,2008:14-18.[8]衣艷君,徐承水.靈芝提取物對果蠅壽命的影響〔J〕.福建師範大學學報自然科學版, 2000,16(4):119-121.[9]劉虹,週甄鴻,劉志宏.靈芝孢子粉藥理作用研究進展〔J〕.天津中醫學院學報,2002,21(4):50-51.[10 ]馮翠萍,程紅艷,唐兵,等.靈芝孢子粉中孢子油提取及生物活性的研究〔J〕.食用菌學報,2008,15(4):63-66.(收稿日期:2008-08- 15修回日期:2009-02-20) (本文編輯:韓威 ) 【監督監測】 為了解青海省海西州碘缺乏病防治情況,根據《青海省實現消除碘缺乏病目標實施方案》的通知及《關於印發青海省碘鹽監測實施細則》要求,結合海西州鹽業資源豐富的特點,於2007年對全州(格爾木市,德令哈市,都蘭縣,烏蘭縣,天峻縣)碘缺乏病防治情況進行調查。按人口比例概率抽樣方法進行抽樣。共採集1540份食鹽樣品(每戶一份),採用GB/T13025.7—1999《製鹽工業通用試驗方法碘離子的測定》的直接滴定法測定鹽碘,依據GB5461—2000《食用鹽》進行判定。採集385件家庭主婦尿樣和697件8~10歲兒童尿樣(採集尿樣的前幾天和當日保持通常飲食,不食用高碘鹽飲食或服用含碘藥物),採用酸消化砷鈰接觸法測定尿碘,對尿碘過高和過低的樣本進行複檢。按1996年國家技術監督局和衛生部頒布的標準對70636名8~10歲兒童進行甲狀腺腫大的觸診並分度。採用學生應答與家庭入戶問卷相結合的方式進行碘缺乏病防治健康教育效果調查(主要內容是碘缺乏的危害及預防措施等)。在每所抽樣學校的五年級中隨機選取一個班的20名學生採用統一試捲進行調查;同時在抽樣學校所在的村隨機選取5戶家庭,採取統一問卷對家庭主婦進行調查,共調查1410名兒童和564名家庭主婦,分別計算知曉率。結果顯示,1540份食鹽樣品中,1350份鹽樣鹽碘含量≥5mg/kg,碘鹽覆蓋率為87.66%。合格碘鹽1289份,合格碘鹽食用率為83.70%,碘鹽合格率95.48%。鹽碘含量<5mg/kg的食鹽190份,非碘鹽食用率為12.33%。 385名家庭主婦尿碘中位數為150.48μg/L,697名8~10歲兒童尿碘中位數為147.75μg/L,尿碘低於20μg/L的兒童佔3.75%。 70636名8~10歲兒童中,甲狀腺腫大者777人,腫大率為1.1%。兒童和家庭主婦健康教育知曉率分別為90.25%和86.1%。調查結果顯示海西州居民碘鹽食用率、覆蓋率平均值達到了基本消除碘缺乏病指標,但是,地區間還存在一定的差距,格爾木和烏蘭合格碘鹽食用率和覆蓋率較低(格爾木:72.92%,76.39%;烏蘭:70.49%,78.82%),主要原因是兩地均位於鹽湖附近,當地原鹽市場管理困難,市場受到非碘鹽的衝擊。尿碘、甲狀腺腫大率均達到了防治目標,表明在各級政府的重視下,各項措施落實取得了顯著成效,但仍然要充分認識到碘缺乏病防治工作的重要性、艱鉅性、反复性和復雜性。應進一步加強部門協作,落實齊抓共管。依法加強碘鹽產、供、銷環節的監督監測和管理。問卷調查結果提示需進一步加大宣傳力度,特別是對重點人群的宣傳要有舉措,使他們認識到碘缺乏的危害及防治方法,提高自我保健意識,自覺購買、科學使用合格碘鹽

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